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尼帕病毒核酸采样与检测服务构建须知

2026年01月27日

尼帕病毒核酸采样到检测全流程

一、采样到检测的完整环节（共8个核心环节） 

环节编号

环节名称

操作内容

所需时间

关键设备/材料

1

人员准备与防护

采样人员穿戴三级防护（防护服、N95口罩、护目镜、双层手套）

5-10分钟

个人防护装备（PPE）

2

样本采集

采集鼻咽拭子/咽拭子（优先）、血液、尿液等样本

2-3分钟/人

病毒保存管、拭子、采血管

3

样本保存与转运

样本置于病毒保存液，4℃冷链运输至实验室

运输时间可变

生物安全运输箱、冰袋

4

样本接收与灭活

实验室接收样本，在生物安全柜内进行裂解灭活

10-15分钟

生物安全柜、裂解液

5

核酸提取

使用核酸提取试剂盒提取病毒RNA

30-40分钟

核酸提取仪/手工提取试剂盒、离心机

6

试剂配制

配制RT-PCR反应体系（引物、探针、酶等）

15-20分钟

移液器、PCR管、冰盒

7

扩增检测

上机进行荧光定量RT-PCR扩增

1.5-2小时

实时荧光定量PCR仪

8

结果判读与报告

分析扩增曲线，计算Ct值，出具检测报告

10-15分钟

分析软件、报告系统

总耗时：从样本进入实验室到出具结果，常规流程约3-4小时（不含样本运输时间）。若采用快速检测试剂盒（如等温扩增技术），可缩短至1-1.5小时，但灵敏度可能略低。

关键说明：

环节数：严格意义上的实验室检测环节为6个（环节4-8），若包含采样和运输则为8个

时间计算：上述时间为"实验室操作时间"，实际工作中需考虑样本批次处理、质控、复核等，单批次（10-20份样本）从接收到报告通常需4-5小时

紧急情况：若采用快速检测平台（如便携式PCR仪），可在2小时内出结果，但需验证方法学性能

二、核心检测设备清单（实验室级配置） 

设备类别

具体设备

数量建议

关键参数要求

样本前处理

生物安全柜（Ⅱ级A2型）

1-2台

风速≥0.5m/s，HEPA过滤

核酸提取

全自动核酸提取仪

1台

通量≥12样本/批次，或手工提取试剂盒

扩增检测

实时荧光定量PCR仪

1-2台

96孔板，支持FAM通道，温控精度±0.1℃

辅助设备

高速离心机（≥12000rpm）

1台

适配1.5mL/2mL离心管


微量移液器（0.5-1000μL）

1套

精度±1%


涡旋混合器

1台

转速可调


冰箱（4℃、-20℃）

各1台

温度稳定

安全设备

高压灭菌器

1台

121℃/30分钟，≥50L容量


紫外灯、洗眼器

按需配置

应急防护

设备配置说明：

基础配置：满足单日检测50-100份样本，需上述全套设备

快速检测配置：若需现场快速筛查，可配备便携式PCR仪，但成本较高

耗材需求：核酸提取试剂盒、PCR反应管、吸头、手套等需按检测量储备

三、检测方法学与性能指标 

主流方法：荧光定量RT-PCR（qRT-PCR），基于尼帕病毒N基因或P基因设计引物探针

性能指标

常规qRT-PCR

快速检测方法（如RT-LAMP）

检测下限

10-100拷贝/反应

100-1000拷贝/反应

特异性

>99%

>95%

检测时间

2-3小时

30-60分钟

设备要求

需PCR仪、专业实验室

水浴锅/恒温金属浴，可现场操作

适用场景

确诊实验室、疾控中心

现场筛查、资源有限地区

结果判读标准：

阳性：Ct值≤35，且有典型S型扩增曲线

可疑：Ct值35-38，需复核或重新采样

阴性：Ct值>38或无扩增曲线


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